产品货号:
GS1412
中文名称:
变性裂解液
英文名称:
Denature Lysis Buffer
产品规格:
10T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
在进行动物细胞蛋白质提取过程中,有些蛋白质比较难溶解,因此较难提取,该产品适用于不溶性细胞骨架、膜蛋白、高度疏水蛋白及集聚并形成沉淀的蛋白,或者体外翻译产生的蛋白。适用于SDS-PAGE、等电点聚焦和2D电泳等,本制品由变性裂解液和蛋白酶抑制剂组成,每次可以处理107个细胞或100mg组织,可以使用10次。
组分 | 规格 |
溶液A | 10mL |
溶液B | 100μL |
保存:-20℃,有效期2年。
- 溶液A若有沉淀析出,可置于30℃水浴中保温10min,并振荡混匀,待沉淀完全溶解,冷却至室温后,即可使用。
- 由于裂解液中蛋白样品含有高浓度的去垢剂及变性剂,可以使用改良型Lowry法蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1487)或抗干扰型蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1485)测定蛋白浓度。
- 对于动物细胞可以使用超声破碎,每次10sec,2~3次,每次间隔5sec,置于冰上冷却,可以提高蛋白得率。
- 在细胞裂解时,如果在进行步骤3前裂解液比较粘,可以先匀浆或超声以剪断基因组,再离心取上清。
- 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算,为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能,将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
- 使用后请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
- 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果,概不承担责任。
- 培养细胞裂解
- 对于贴壁细胞,去除其培养液,用1X PBS洗涤一遍。对于悬浮细胞,3000rpm离心收集细胞,再用1X PBS洗涤一遍。通常每107个细胞或100mm培养板或150cm2培养瓶,可加入1mL溶液A和10μL溶液B,裂解液和细胞应充分接触混匀。
- 冰上静置5~10min,为促进细胞裂解,可用枪头轻轻吹打,后轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角,然后将之转移到1.5mL离心管。在冰上静置5min,期间剧烈振荡3~4次,每次30sec。
- 转置冷冻离心机,4℃,12000rpm(12830g),离心5min,取上清,即可进行后续的电泳、Western blot或免疫沉淀操作。
- 对于贴壁细胞,去除其培养液,用1X PBS洗涤一遍。对于悬浮细胞,3000rpm离心收集细胞,再用1X PBS洗涤一遍。通常每107个细胞或100mm培养板或150cm2培养瓶,可加入1mL溶液A和10μL溶液B,裂解液和细胞应充分接触混匀。
- 组织块裂解
- 组织剪切成细小的碎片,向每100mg组织中加入1mL溶液A和10μL溶液B,置于玻璃匀浆器冰上均质30~50次,直到组织液中没有明显的组织块并成均质状。
- 将匀浆物转移到1.5mL离心管,在冰上静置10min,期间剧烈振荡3~4次。
- 转置冷冻离心机,4℃,12000rpm(12830g),离心5min,取上清,即可进行后续的电泳、Western blot或免疫沉淀操作。
- 组织剪切成细小的碎片,向每100mg组织中加入1mL溶液A和10μL溶液B,置于玻璃匀浆器冰上均质30~50次,直到组织液中没有明显的组织块并成均质状。
- 已经提取的细胞骨架膜蛋白,膜蛋白及高度疏水蛋白,或者集聚并形成沉淀的蛋白的溶解向1~5mg的相关蛋白质样品中加入1mL的溶液A,10μL溶液B混合,冰上静置30min,涡旋振荡1min,离心后取上清。
相关搜索:变性裂解液,Denature Lysis Buffer